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大鼠转化生长因子β试剂盒说明书
发布时间:2022-11-15      点击次数:299

使用目的:
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中转化生长因子β(TGF-β)含量。

实验原理
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠转化生长因子β(TGF-β)水平。用纯化的大鼠转化生长因子β(TGF-β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β(TGF-β),再与HRP标记的转化生长因子β(TGF-β)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β(TGF-β))呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠转化生长因子β(TGF-β)浓度。 
试剂盒组成 
30倍浓缩洗涤液 20ml×瓶 7 终止液 6ml×瓶
2 酶标试剂 6ml×瓶 8 标准品(480pg/ml) 0.5ml×瓶
3 酶标包被板 2孔×8条 9 标准品稀释液 .5ml×瓶
4 样品稀释液 6ml×瓶 0 说明书 份
5 显色剂A液 6ml×瓶 封板膜 2张 
6 显色剂B液 6ml×/瓶 2 密封袋 个
标本要求 
.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤
标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品0μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 
配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色5分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后5分钟以内进行。

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