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本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预
先包被人胎球蛋白 A(FETU-A)多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未
结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物
A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成
黄色，颜色的深浅与样品中人胎球蛋白 A(FETU-A)浓度呈正相关，450nm 波长下测定 OD 值 ，
根据标准品和样品的 OD 值，计算样本中人胎球蛋白 A(FETU-A)含量。
试剂盒组成
酶标包被板 2 孔×4 条 7 底物夜 A 3mL
2 标准品： 00ug/ml 0.6mL 8 底物夜 B 3mL
3 20 倍浓缩洗涤液 20mL 9 终止液 3mL
4 标准品稀释液 3mL 0 说明书 份
5 样本稀释液 3mL 封板膜 张
6 酶标试剂 3mL 2 密封袋 个
备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：00、50、25、2.5、6.25、3.2ug/ml
操作步骤
、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡 30 分钟。
2、配液：用蒸馏水将 20 倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔 、
待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品 50μL；待测样本孔中先
2
加入待测样本 0μL，再加样本稀释液 40μL（即样本稀释 5 倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育 30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 min，甩去洗涤液，吸水纸
上拍干，如此重复洗板 4 次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液 50μL，空白对照孔不加。
7、温育：重复 4 的操作。
8、洗板：重复 5 的操作。
9、显色：每孔先加入显色剂 A 液 50μL，再加入显色剂 B 液 50μL，37℃避光显色 5min。
0、终止：取出酶标板，每孔加终止液 50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
、测定：以空白孔调零，在终止后 5 分钟内，用 450nm 波长测量各孔的吸光值（OD 值）。
2、计算：根据标准品的浓度及对应的 OD 值，计算出标准曲线的直线回归完美体育平台，再根据样
本的 OD 值，在回归完美体育平台上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。zui终浓
度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
样本要求
、样本不能含叠氮钠（NaN 3 ），因为叠氮钠（NaN 3 ）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立即
试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
注意事项
、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释 5 倍，计算结果乘以 5 才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为 3.2-00ug/ml ，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准
确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（ 3.2-00ug/ml 范围内），乘以总稀释倍数
即为样本zui终浓度。
6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液 、
样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
9、底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。