降钙素基因相关肽样本的物种 应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST 来进行不同物种蛋白同源性比对。
降钙素基因相关肽一抗宿主物种的选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、等)的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。
二抗的选择 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用, 二抗一般连接荧光素FITC 或发光团。
上海完美体育平台生物科技有限公司特殊抗体的保存条件:
. 酶联抗体:永远保存在4 度,避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失
2. 偶联抗体:所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体,对
光极为敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的!
3. IgG3 的同型对照:永远保存在4 度,避免冻起来。因为如果出现冻融过程,该抗体非常
容易形成多聚体无论是保存还是运输,避免反复冻融!
反复冻融会导致抗体变性,导致多聚体形成,从而降低抗体的结合能力!
其它相关信息:"PAIELISA试剂盒 人纤溶酶原激活物抑制因子 ELISA试剂盒 " Human plasminogen activator inhibitor,PAI ELISA试剂盒
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关于加入甘油保存:有些人会加50%的甘油到抗体完美体育平台避免反复冻融,甘油在-20 度 会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。但是abcam 仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性;而abcam 只对按照条件保存的抗体提供质量保证!加入甘油的溶液不建议在-80 度保存,因为这已经超过了甘油的冰点。如果您要加入甘油来保存抗体的话,请谨慎注意无菌操作,避免污染!
关于蛋白保护剂:
蛋白在高浓度时更不容易降解( mg/ml 或者更高),这就是为什么在抗体中加入BSA 之类作为稳定剂的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。